Coelenterazine 400 a 腔肠素400a；DeepBlue C；海肾荧光素酶（Rluc）；萤火虫荧光素酶（Fluc）；BRET2 生物发光共振能量转移 ；CAS NO：70217-82-2；

产品名称	产品编号	规格
Coelenterazine 400 a 腔肠素400a	MX4610-500UG	500μg
Coelenterazine 400 a 腔肠素400a	MX4610-1MG	2×500μg
Coelenterazine 400 a 腔肠素400a	MX4610-5MG	10×500μg

腔肠素（Coelenterazine）是在水生生物中发现的一种发光基团（luminophore），是许多荧光素酶的作用底物，包括海肾荧光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜锚定荧光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和薮枝虫荧光素酶（Obelia luciferase），和发光蛋白包括水母发光蛋白（Aequorin）的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶，在含分子氧的条件下，氧化腔肠素产生高能量的中间产物，在此过程发射蓝色光，光波长在450~480nm【见图1】。而甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶（FLuc）系统不同，其在含分子氧的条件下，还需要ATP和Mg2+的存在才能同时发光，光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异，RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究，或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。腔肠素应用甚是广泛，包括：1）活细胞或组织的钙离子检测；2）细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子（活性氧，ROS）化学发光检测；3）基因报告基因检测；4）动物活体检测；5）ELISA和生物发光共振能量转移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）药物高通量筛选（HTS）；

天然腔肠素（Coelenterazine Native，CTZ-Native）是自然界中存在最丰富的一种腔肠素，也是目前应用最普遍的一种标准底物。不仅是脱辅基水母发光蛋白（APO）的底物，也是海肾荧光素酶（Rluc）和分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）等荧光素酶的作用底物。前者用于检测钙离子浓度，后者用作荧光素酶的报告基因检测系统。还可用于生物共振能量转移BRET，细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平（ROS）的化学发光检测等。

腔肠素400a（Coelenterazine 400a，CTZ 400a），常称为DeepBlue C，是一种天然腔肠素衍生物，是一款良好的海肾荧光素酶（Rluc）底物，但不适合用作分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）底物。可用来实时监测钙离子浓度，报告基因分析，以及用作生物发光共振能量转移（BRET）的首选底物。腔肠素400a的最大射波峰值约在400nm，从而对GFP受体的发射峰干扰最小。腔肠素400a用在BRET2体系，该体系通常用来评估蛋白-蛋白相互作用，包括涉及G蛋白偶联受体介导的药物细胞信号通路分析，是一种有效的药物开发和筛选工具。

产品描述

1）   CAS NO：70217-82-2

2）   化学名：2,8-Dibenzyl-6-phenyl-imidazo[1,2a]pyrazin-3-(7H)-one; 6-phenyl-2,8-bis(phenylmethyl)-imidazo [1,2-a]pyrazin-3(7H)-one;

3）   同义名：CTZ 400a; 1-bisdeoxycoelenterazine; di-dehydrocoelenterazine; DeepBlueCTM; 腔肠素400a；

4）   分子式：C26H21N3O

5）   分子量：391.5 g/mol

6）   纯度：>97%

7）   外观：黄色至橙色固体

8）   溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO

9）   化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，且保存于惰性气体内。至少一年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   腔肠素（Coelenterazine， CTZ）及衍生物最好以完全冻干粉的状态保存在惰性气体内，密封后置于-20℃或-70℃长期避光保存。管内即使有微量空气，也会随着时间慢慢氧化腔肠素使其活性丧失。

2）   腔肠素（Coelenterazine， CTZ）及衍生物不建议以储存液的形式保存，最好于实验前配制新鲜的溶液。不建议将配好的腔肠素溶液储存在-20℃或-70℃，因其具有一个高能量的二氧杂环丁酮环形结构，即使在低温条件下都会自发降解。

3）   商业化腔肠素的种类繁多，有天然腔肠素，以及各种腔肠素衍生物（比如，腔肠素h，腔肠素400a，腔肠素e，腔肠素f，腔肠素hcp）。它们对钙离子的亲和力，光谱特性，以及应用倾向上会有差异，详见附录1—天然腔肠素及其衍生物的光谱特性，附录2—天然腔肠素及其衍生物的应用差异选择适当的产品。

4）   腔肠素400a（Coelenterazine 400a）的另一个通用名DeepBlueCTM是BioSignal Packard公司的商标名。

5）   不同的BRET系统对底物的选择上会有差异（附录3—用于PPI研究的BRET系统汇总表），腔肠素400a 主要用在BRET2系统。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、 腔肠素400a的溶解事项

1）   腔肠素400a不溶于水，接触到空气，水分或任何氧化剂都不稳定。溶于甲醇或乙醇，千万不要溶于DMSO，因会发生未知反应引起腔肠素400a的快速降解并生成未知的代谢产物。

2）   毒性最小的溶剂是无水乙醇，可溶解粉末配制成0.1-1mg/ml溶液，之后加入需要的缓冲液，尽量保持缓冲液pH小于7.0，因碱性条件会快速降解腔肠素400a，有时沉淀会立即产生。

二、 腔肠素400a的保存事项

最好在使用前，才用无水乙醇溶解腔肠素400a粉末，然后用所选的缓冲液稀释并混匀。此时配好的工作缓冲液需静置20-30min使其稳定（因部分底物会发生自氧化）后才进行体外实验。该工作液能稳定保存几个小时（室温3-4h），仅微弱的信号衰减可能发生。

不建议将腔肠素400a的乙醇溶液置于-20℃或-70℃保存，因天然腔肠素及任何衍生物含有一个高能量的二氧杂环丁酮环形结构，即使在低温条件下都会自发降解。

附录1 天然腔肠素及其衍生物的光谱特性

附录2 天然腔肠素及其衍生物的应用差异

表2 –天然腔肠素及其衍生物的应用差异
产品名称	货号	应用特征
Coelenterazine native	MX4606	应用非常广泛的标准底物。腔肠素是天然水母发光蛋白复合物的发光基团，也是海肾荧光素酶（Rluc）的底物。底物的快速再生（fast regeneration）比较重要的实验推荐使用天然腔肠素。 1）生物发光检测钙离子的灵敏度非常高，检测范围从0.1µM到＞100µM；2）使用腔肠素监测报告基因表达是其主要应用；3）其他应用包括生物共振能量转移BRET，化学发光检测细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平（ROS）；
Coelenterazine h	MX4607	1）腔肠素h形成的水母发光蛋白复合物比天然腔肠素复合物的光强度高10倍以上；2）比天然腔肠素对钙离子敏感度更高；3）也适用报告基因分析。
Coelenterazine 400 a	MX4610	也称为DeepBlue C，是一种腔肠素衍生物，用作海肾荧光素酶Rluc的底物，发射峰约400nm。含GFP受体的BRET研究是Rluc的首选底物，因其对GFP受体的发射波干扰非常小。不可用作Gluc底物。
Coelenterazine hcp	MX4614	其生物发光强度最高（腔肠素hcp形成水母发光蛋白复合物的荧光强度比天然腔肠素复合物高190倍），对Ca2+反应速度快。
Coelenterazine cp	MX4613	Coelenterazine cp产生水母发光蛋白复合物的光强度是天然腔肠素复合物的15倍，且具有更快的Ca2+反应性。
Coelenterazine f	MX4612	腔肠素f形成的水母发光蛋白复合物的光强度是天然腔肠素复合物的20倍，最大发射波长约长8nm。具有最好的细胞渗透性。当需要具极高钙离子Ca2+灵敏度的水母发光蛋白复合物，建议用腔肠素f。
Coelenterazine n	MX4615	所有的腔肠素衍生物中荧光强度最弱，对Ca2+反应时间明显慢于天然腔肠素。一种非常有用的低灵敏腔肠素。
Coelenterazine e	MX4611	体外水母发光蛋白再生中腔肠素e的速度最高，具有双发射峰，分别为405nm和465nm，使其能在pCa 5-7范围内通过双发射峰荧光强度比率的方式测定Ca2+浓度，提高检测准确度。但由于渗透性差，不适合胞内应用。在溶液中稳定性差。
Coelenterazine i	MX4616	体外腔肠素i水母发光蛋白复合物的荧光强度仅为天然腔肠素复合物的3%，在所有腔肠素衍生物种对钙离子的反应时间最慢。
Coelenterazine ip	MX4618	体外腔肠素ip水母发光蛋白复合物的荧光强度几乎比天然腔肠素复合物高50倍，但对钙离子的反应时间比天然腔肠素慢。
Coelenterazine fcp	MX4617	腔肠素fcp形成的水母发光蛋白复合物的光强度是天然腔肠素复合物的135倍。
Methyl Coelenterazine	MX4619	非常优越的抗氧化剂，靶向细胞内来源于单态氧和超氧化物阴离子产生的活性氧物质（ROS）。

 

附录3 用于PPI研究的BRET系统汇总表

名称§	荧光素酶	荧光素酶最大发射*	荧光蛋白FP	荧光蛋白最大发射*	荧光素（底物）	文献来源
BRET1	Rluc/Rluc8	480	eYFP	530	Coelenterazine-h	Xu et al.
BRET2	Rluc	395	GFP2	510	DeepBlueC	Bertrand et al.
eBRET2	Rluc8	395	GFP2	510	DeepBlueC	Kocan et al.
BRET3 (1)	Rluc8	480	mOrange	564	Coelenterazine-h	De et al.
BRET3 (2)	Fluc	565	DsRed	583	d-Luciferin	Gammon et al
eBRET	Rluc	480	eYFP	530	EnduRen	Pfleger et al.
BAF-Y	Rluc	480	eYFP	530	ViviRen	Hoshino et al.
BRET3.1	Rluc8	515	mOrange	564	Coelenterazine-v	Dragulescu et al.
BRET4	Rluc8	480	TagRFP	584	Coelenterazine-h	Dimri et al.
BRET4.1	Rluc8	515	TagRFP	584	Coelenterazine-v	Dragulescu et al.
BRET5	Rluc8.6	535	TagRFP	584	Coelenterazine-h	Dragulescu et al.
BRET6	Rluc8.6	535	TurboFP	635	Coelenterazine-h	Dragulescu et al.
BRET6.1	Rluc8.6	570	TurboFP	635	Coelenterazine-v	Dragulescu et al.
BRET7	Rluc8	515	TurboFP	635	Coelenterazine-v	Dimri et al.
BRET8	Rluc8.6	535	TurboFP	635	Coelenterazine-h	Dimri et al.
GlucBRET	hGluc	470	tdTomato	580	Coelenterazine	Li et al.
NanoBRET	NLuc	460	HaloTag	618	Furimazine	Machleidt et al.
LuxBRET	LuxAB	490	eYFP	530	FMNH2 + Long-chain fatty aldehyde	Cui et al.
VlucBRET	Vluc	460	eYFP	530	Vargulin	Otsuji et al.
§: These names are not absolute or exclusive, for reference only;*:Peak wavelength in nm Adapted and extended from Borroto-Escuela et al. Bioluminescence resonance energy transfer methods to study G protein-coupled receptor-receptor tyrosine kinase heteroreceptor complexes. Methods Cell Biol. 2013; 117:141–164.

相关产品

货号	名称	规格
MX4606-1MG	Coelenterazine Native 天然腔肠素	2×500μg
MX4607-1MG	Injectable native Coelenterazine 注射用天然腔肠素	2×500μg
MX4608-1MG	Coelenterazine h 腔肠素h	2×500μg
MX4609-1MG	Injectable h-Coelenterazine 注射用腔肠素h	2×500μg
MX4610-500UG	Coelenterazine 400 a 腔肠素400a	500μg
MX4611-500UG	e-Coelenterazine 腔肠素e	500μg
MX4612-500UG	Coelenterazine f 腔肠素f	500μg
MX4613-250UG	Coelenterazine cp 腔肠素cp	250μg
MX4614-250UG	Coelenterazine hcp 腔肠素hcp	250μg