EHA101菌株;农杆菌感受态细胞;Rifampicin(Rif) 利福平;Kanamycin(kan)卡那霉素;EHA105;LBA4404;GV3101;AGL1;植物转基因研究;
产品名称 |
产品编号 | 规格 | |
GV3101(pSoup) Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 |
MF2467-1000UL |
10×100μl |
|
MF2467-5000UL | 50×100μl |
1220 |
产品描述:
GV3101菌株的背景为C58型,核基因含利福平抗性基因rif。为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90(pTiC58DT-DNA),此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pMP90(pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pMP90(pTiC58DT-DNA)型Ti质粒携带筛选标签Gent,赋予GV3101菌株庆大霉素抗性。在GV3101菌株中转入help质粒:pSoup,即得到GV3101(pSoup)菌株,可协助pGreen,62SK,pGs2系列质粒在农杆菌内复制,同时赋予该菌株四环素(Tet)抗性。本菌株适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。
我司(金畔生物)提供的GV3101(pSoup)化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,基因型C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) (gentR) Nopaline (pSoup-tetR),经pGs2质粒(卡那霉素抗性)检测转化效率>103 cfu/μg DNA。
产品组分:
组分编号 | 组分名称 | 货号(规格) | |
MF2467-1000UL | MF2467-5000UL | ||
MF2467-A | GV3101(pSoup) Chemically Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2467-B | pGs2 Control Vector (10ng/μl) | 10μl | 10μl |
保存与运输条件:
保存:-80℃保存,一年有效。
运输:干冰运输。
注意事项
1) 感受态细胞应保存在-80℃,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。
2) 整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3) 加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。
4) 为确保最高转化效率,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温。
5) 转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。
6) 平板上克隆密度过大时,由于营养不足,克隆生长变慢,菌落变小。为获得大菌落,应减少质粒用量。
7) 利福平浓度应≤25μg/ml,过高浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。
8) 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失,但链霉素不利于农杆菌的转基因操作,一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素,因Ti质粒丢失的概率极低(基本可以忽略)。
9) GV3101(pSoup)感受态细胞虽具有四环素抗性,但在转入目标质粒涂板筛选阳性克隆时,只需加入目标质粒抗性的抗生素,不用加四环素。
10) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1) 取-80℃保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化,达到冰水混合状态时插入冰浴中使其完全融化。
2) 往100μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg(体积不大于10μl)目的DNA(注意:转化效率较高,第一次使用前建议做预实验确定适宜的质粒量),用手拨打管底使其混匀,依次于冰上静置5min,液氮5min,37℃水浴5min,冰浴5min。
3) 加入700μl无抗生素的LB或YEB液体培养基,于28℃振荡培养2~3h。
4) 6,000rpm离心1min,留取100μl左右上清,之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的LB或YEB平板上,用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min,待液体被吸收后,倒置平板,28℃培养2-3天。
【注意】:当平板只含50μg/ml卡那霉素时,28℃培养48h即可;当平板中同时加入50μg/ml卡那霉素和20μg/ml利福平时,需28℃培养60h;若使用的平板含50μg/ml利福平,需在28℃培养72-90h。
相关产品
产品编号 | 产品名称 | 规格 |
MF2301-1000UL | EHA101 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 | 10×100μl |
MF2302-1000UL | EHA105 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 | 10×100μl |
MF2303-1000UL | LBA4404 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 | 10×100μl |
MF2304-1000UL | GV3101 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 | 10×100μl |
MF2305-1000UL | AGL1 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 | 10×100μl |
MF2467-1000UL | GV3101(pSoup) Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 | 10×100μl |
MF2469-1000UL | GV3101(pSoup-p19) Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 | 10×100μl |
MF2471-1000UL | GV3101(pJIC SA-rep) Chemically Competent Cell化学感受态细胞 | 10×100μl |
MF2473-1000UL | EHA105(pSoup) Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 | 10×100μl |
MF2475-1000UL | AGL1(pSoup) Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 | 10×100μl |
MF3732-2UG | pGreenII 0800-Luc Plant Expression Vector植物表达载体 | 2μg |
MF3733-2UG | pGreenII 62-SK Plant Expression Vector植物表达载体 | 2μg |
MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade利福平 | 1g |
MS0019-10G | Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 | 10g |
MS0020-25G | Tetracycline Hydrochloride, USP Grade盐酸四环素 | 25g |
MS0023-25G | Streptomycin Sulfate, USP Grade硫酸链霉素 | 25g |
MX7401-500G | Agar, Gel Strength>1200 g/cm2琼脂粉(植物组培级) | 500g |
MS0006-30ML | Plant Preservative Mixture (PPM)植物组培抗菌剂 | 30ml |
附表1固体和液体LB培养基配方
组分Component | LB(液体)/升 | LB(固体)/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 10g | 10g |
酵母提取物Yeast extract | 5g | 5g |
氯化钠NaCl | 10g | 10g |
1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
琼脂Agar | / | 15g |
附表2固体和液体YEB培养基配方
组分Component | YEB(液体)/升 | YEB(固体)/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 5g | 5g |
酵母提取物Yeast extract | 1g | 1g |
牛肉浸膏Beef Extract | 5g | 5g |
蔗糖Sucrose | 5g | 5g |
七水硫酸镁MgSO4·7H2O | 0.49g | 0.49g |
1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
琼脂Agar | / | 15g |
附表3常见农杆菌对抗生素敏感性总表
农杆菌菌株 | 羧苄(carb) | 链霉素(strep) | 利福平(rif) | 庆大霉素(gent) | 卡那霉素(kan) |
EHA101 | S | S | R | S | R |
EHA105 | S | S | R | S | S |
LBA4404 | S | R | R | S | S |
GV3101 | S | S | R | R | S |
AGL1 | R | S | R | S | S |
【备注】:S代表敏感,R代表抗性。 |