产品组分：

菌株描述

XL10-Gold是目前转化效率最高的感受态细胞，由Stratagene公司开发用于大质粒的转化且保持高转化效率。XL10-Gold菌株具Hte（Hightransformation efficiency）表现型，明显提高连接和大质粒分子的转化效率。XL10-Gold能够降低大小偏好，产生更大、更复杂的质粒文库，能非常理想的用于构建质粒DNA文库。XL10-Gold缺失所有已知的限制性酶系统[Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]。同时缺失核酸内切酶（endA）和重组酶（recA），前者大大提高纯化DNA的产量和质量，后者有助于确保插入DNA的稳定。F′附加体上lacIqZΔM15基因的存在使其可进行蓝白斑筛选。XL10-Gold菌株具四环素和氯霉素抗性。

XL10-Gold菌株基因型：Tetr Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F ́ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr) Amy Camr]

产品描述

本品是XL10-Gold菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞2×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1. 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。
2. 最好在冰上融化感受态细胞。
3. 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
4. 转化高浓度质粒或高效率连接产物可相应降低最终用于涂板的菌量。
5. XL10-Gold菌株本身能耐受＜40μg/ml氯霉素，但对100μg/ml氯霉素很敏感。
6. 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
7. 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。
8. 采用常规操作流程转化XL10-Gold感受态细胞，转化效率可达2×109 cfu/μg DNA。若是对转化效率要求更高，可尝试使用Stratagene的标准操作流程。
9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1. 从-80℃取出感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。向融化的感受态细胞中加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹混匀（避免用移液枪上下吹打），冰浴静置25min。
2. 42℃热激35s【注意：热激＜30s或＞40s都会导致转化效率急剧降低】，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
3. 向每个离心管中加入700 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
4. 5000rpm离心1min，吸走900 μl上清，留取100μl左右轻轻吹打重悬菌体，加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃过夜培养。【注意】：a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可将所有转化产物涂布平板。b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

标准操作流程【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1. 冰上提前预冷14ml BD Falcon聚丙烯圆底离心管， 42℃预热NZY+肉汤培养基。
2. 从-80℃取出感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。用手轻弹混匀吸取100 μl细胞到预冷的14ml离心管内。
3. 加4μl β-ME到细胞内。【β-ME能提高转化效率】
4. 轻弹管子。置于冰上孵育10min，每2min轻弹混匀细胞一次。
5. 往细胞内加入0.1-50ng目的DNA（或2μl连接产物），轻弹混匀细胞，冰上静置孵育30min。
6. 42℃水浴热激30s，热激过程的持续性非常重要。冰上静置2min，此过程不要摇动离心管。

1. 向每个离心管中加入900 μl预热的无菌NZY+肉汤培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，225-250 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
2. 吸取≤200 µl转化菌液，加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上（若需要颜色反应，平板含IPTG+ X-gal），用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃过夜培养。【注意：若是进行蓝白斑筛选，37℃至少培养17h，使得颜色能生成。之后再将平板置于4℃孵育2h，能加强颜色反应。】

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