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货号 |
产品名称 |
规格 |
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| MF2312-2000UL | TOP10 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 | 20×100μl | |
| MF2312-10000UL | TOP10 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 | 100×100μl |
产品组分：
| 组分编号 | 组分名称 | 货号（规格） | |
| MF2312-2000UL | MF2312-10000UL | ||
| MF2312-A | TOP10 Competent Cell | 20×100μl | 100×100μl |
| MF2312-B | Control Vector puC19, 10 pg/µl | 10μl | 10μl |
菌株描述
TOP10菌株类似于DH10B菌株，具有以下特征：1）hsdR使其对PCR扩增产物来源非甲基化DNA实现有效转化；2）mcrA使其对基因组制备物来源的甲基化DNA实现有效转化；3）lacZΔM15使其能对重组克隆实现蓝白斑筛选；4）endA1确保得到更高纯化的DNA，下游应用得到更好的结果，归因于内切酶I非特异性酶切活性的缺失；5）recA1降低克隆DNA非特异性重组的频率。TOP10是目前实验室最常用的克隆菌株之一，适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定复制。
TOP10菌株基因型：F- mcrA Δ( mrr-hsdRMS- mcrBC) Φ80 lacZΔM15 Δ lacX74 recA1 araΔ139 Δ( ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG
产品描述
本品是TOP10菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
保存与运输条件：
保存：-80℃保存，6个月有效。
运输：干冰运输。
注意事项
1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。
2） 最好在冰上融化感受态细胞。
3） 转化高浓度质粒或高效连接产物需相应减少最终涂板的菌量。
4） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
5） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
6） 产品包装内含载体pUC19 DNA(10 pg/μl)，供对照实验用。
7） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
1.1 从-80℃取出TOP10感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。
1.2 向融化的感受态细胞中加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹混匀（避免用移液枪上下吹打），冰浴静置25min。
1.3 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
1.4 向每个离心管中加入700 μl无菌培养基（2YT或LB，不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
1.5 复苏完成后，5000rpm离心1min收集菌体，留100μl左右上清轻轻吹打重悬菌体并涂布到无菌固体培养基（2YT或LB，含相应抗生素）上。
1.6 将平板正置于室温（或37℃）直至液体被吸收，之后，37℃培养箱内倒置培养过夜。如果进行蓝白斑筛选，至少培养13h。
【注意】：
a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少，可通过离心（5,000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。
b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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| MS0021-10G | Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 | 10g |
| MS0018-10G | Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 | 10g |
| MS0017-5G | Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 | 5g |
| MS0019-10G | Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 | 10g |
| MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade利福平 | 1g |
附表1固体和液体LB培养基配方
| 组分Component | LB（液体）/升 | LB（固体）/升 |
| 胰蛋白胨Tryptone | 10g | 10g |
| 酵母提取物Yeast extract | 5g | 5g |
| 氯化钠NaCl | 10g | 10g |
| 1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
| 琼脂Agar | / | 15g |
附表2固体和液体2-YT培养基配方
| 组分Component | 2YT（液体）/升 | 2YT（固体）/升 |
| 胰蛋白胨Tryptone | 16g | 16g |
| 酵母提取物Yeast extract | 10g | 10g |
| NaCl | 5g | 5g |
| 1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
| 琼脂Agar | / | 15g |