膜电位荧光探针，Di-4-ANEPPS，Di-8-ANEPPS，ANEP染料，Fast-response probe快速响应探针，CAS：90134-00-2；

订购信息：

产品描述：

ANEP (AminoNaphthylEthenylPyridinium)染料由Leslie Loew和同事开发，是最灵敏且稳定的快速响应探针，能检测亚毫秒级的膜电位变化。Di-4-ANEPPS（MX4038）和Di-8-ANEPPS（MX4039）在各种组织、细胞和模型膜系统中表现出相当一致的荧光强度变化率（10%荧光变化/100mV）。ANEP染料的电子结构发生变化，从而，它们的荧光光谱对周围的电场变化做出响应。这些光学响应足够快来检测兴奋细胞（包括单个神经元、心肌细胞和完整组织制备物）的瞬时电位变化。另外，ANEP染料的激发光谱呈现出电位依赖的迁移，从而使其能通过测定激发波长下的荧光比来定量膜电位。ANEP染料结构上的差异使其适用于各种特定应用（见附录I和II）。

电位敏感ANEP染料的特征：

①两性离子分子，在不同细胞和组织样本中表现出最稳定的电位响应。

②结合到磷脂膜上的最大激发和发射波长约为465/635nm【但光谱特征与环境密切关联】

③非荧光直至结合到膜上

④溶于乙醇、DMSO和DMF【Di-2-ANEPEQ（MX4040）是水溶性的ANEP染料】

⑤快速响应探针，适用于检测亚毫秒的膜电位变化

Di-4-ANEPPS是各种细胞和组织类型中表现最稳定的电位探针。细胞膜电位的变化与染料激发荧光强度的变化相关。Di-4-ANEPPS能快速被细胞内在化，因此，主要用于短期实验。我司（金畔生物）也提供Di-8-ANEPPS（MX4039），亲脂性更好且能更好的保留在质膜外层。

基本特性：

1. CAS NO：90134-00-2
2. 化学名：Pyridinium, 4-(2-(6-(dibutylamino)-2-naphthalenyl)ethenyl)-1-(3-sulfopropyl)-, hydroxide, inner salt
3. 分子式：C28H36N2O3S 
4. 分子量：480.66g/mol
5. 外观：橙色至暗红色固体
6. 纯度：≥95%（HPLC）
7. 荧光：λex 496 nm, λem 705 nm in methanol【需注意：相较于在有机溶剂内，苯乙烯染料与脂质结合后通常发生很大的蓝光迁移】
8. 溶解性：溶于DMSO、乙醇、DMF
9. 化学结构式： 

保存与运输方法

保存：+4℃干燥避光保存，可置于-20℃长期干燥避光保存，2年有效。

运输：室温运输。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1.储存液制备

将低温保存的冻干粉置于室温回温至少20min，低速离心后，将其溶于有机溶剂比如乙醇、DMSO或DMF配制成1mg/ml（~2mM）的储存液。将储存液避光保存在+4℃。

2.ANEP染料的细胞加载

2.1批量加载

爬片培养的贴壁细胞一般通过将少量的染料储存液（比如溶于DMSO）加入细胞培养基（终浓度为0.2-2μM）进行标记即可。更高的染料浓度（10-50μM）用于标记灌注的组织样本。通常要加0.05% Pluronic®F-127（MS4301）在标记溶液内，以提高染料的溶解（对于亲脂性更高的ANEP染料比如Di-8-ANEPPS尤其不能省略）。低标记温度（4-20℃）能抑制染料的内在化。含探针的溶液孵育10-20min，细胞用不含染料的培养基清洗3次。

2.2逆行标记

特定的神经元群细胞可通过定位压力注射高浓度的染料溶液（10-20mg/ml，溶于DMSO或乙醇）进入神经组织来实现标记。

3.荧光测定

一般通过记录激发在450nm和510nm，发射在＞570nm处的荧光强度来进行荧光比率成像测定。当膜超极化，荧光强度比率（F450/F510）降低。电位响应的校准可通过使用离子载体缬氨霉素（MS0049）和添加不同钾离子浓度到细胞外培养基来调整多种膜电位来实现。

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