描述
Puromycin Dihydrochloride (10mg/ml)
嘌呤霉素盐酸盐（10mg/ml）
产品标签
Puromycin嘌呤霉素；G418 SulfateG418硫酸盐；Geneticin遗传霉素；Puromycin resistance gene (Pac)；Blasticidin S杀稻瘟菌素（灭瘟散）；Zeocin博莱霉素；CAS：58-58-2
产品信息
|
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格（元） |
|
Puromycin Dihydrochloride (10mg/ml)嘌呤霉素盐酸盐（10mg/ml） |
MS0011-1ML |
1ml |
280 |
|
Puromycin Dihydrochloride (10mg/ml)嘌呤霉素盐酸盐（10mg/ml） |
MS0011-5ML |
5×1ml |
1100 |
|
Puromycin Dihydrochloride (10mg/ml)嘌呤霉素盐酸盐（10mg/ml） |
MS0011-10ML |
10×1ml |
1980 |
产品描述
嘌呤霉素（Puromycin），来源于白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）代谢产物的一种氨基糖苷类抗生素，
有效抑制革兰氏阳性菌生长，对抗酸杆菌的抑制活性相对较弱，但对革兰氏阴性菌的抑制活性更弱。还能抑制原生生物、藻类、哺乳动物和昆虫细胞的生长，一般2天内能杀死99%的细胞。作用机制在于：嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的结构类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸肽链中，导致肽链合成的永久终止，进而阻止蛋白质合成。嘌呤霉素还具有抗肿瘤活性。作为蛋白合成抑制剂，用来研究细胞分化中控制基因顺序表达和协同表达的转录调控机制。
对嘌呤霉素的抗性来自嘌呤霉素产生菌内发现的pac基因，其表达产物嘌呤霉素N-乙酰转移酶（puromycin N-acetyl-transferase）可通过乙酰化嘌呤霉素使其失活。这一特性使得嘌呤霉素常用来筛选和维持培养携带pac基因的哺乳动物细胞株，特别是慢病毒感染的细胞株。现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。某些情况下，也能用来筛选携带pac基因的大肠杆菌菌株。嘌呤霉素在CRISPR/Cas9基因编辑系统中也发挥重要作用。
本品为溶于水的嘌呤霉素盐酸盐溶液，浓度为10mg/ml，经0.2 μm滤膜过滤得到的无菌溶液，直接用培养基稀释到工作浓度即可。真核细胞常用的筛选浓度为1-10µg/ml。
产品特性
1）化学名：3′-[α-Amino-p-methoxyhydrocinnamamido]-3′-deoxy-N,N-dimethyladenosine dihydrochloride
2）同义名：Stylomycin hydrochloride; CL 13900 dihydrochloride; P638 dihydrochloride; CL16536; NSC 3055;
3）CAS NO：58-58-2
4）分子式：C22H29N7O5·2HCl
5）分子量：544.43 g/mol
6）外观：无菌溶液
7）纯度：＞98% (HPLC)
8）化学结构：
保存与运输方法
保存：-20℃干燥保存，至少1年有效。
运输：冰袋运输。
使用方法
- 试剂准备
第一次收到本品，可根据单次用量，将嘌呤霉素（10mg/ml）无菌分装，置于-20℃保存，尽量减少反复冻融次数。
2.建议工作浓度
哺乳动物细胞：1-10 μg/ml，最佳工作浓度使用宿主细胞杀灭实验（杀灭曲线）来确定；
大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选敏感转化菌株，使用浓度为100-125μg/ml。
【注意】：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌阳性转化子不仅需精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身状态影响。
3、杀灭曲线的建立
嘌呤霉素合适的筛选浓度与细胞类型、生长状态、细胞密度、代谢情况，以及细胞所处周期等因素有关。为了筛选到稳定表达的细胞株，确定杀死未转染或感染细胞所需的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次实验一定要建立杀灭曲线（kill curve），筛选到适合自身实验体系的最优筛选浓度。
1)于24孔板加入500μl/孔制备好的细胞悬液，铺足够的孔以保证后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜。理想情况开始抗生素筛选时，细胞达到较高的密度（~60-80%），常用的细胞密度如下：
贴壁细胞：0.8 – 3.0 x 105 cells/ml
悬浮细胞：2.5 – 5.0 x 105 cells/ml
2)准备筛选培养基：含梯度浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（比如，设置0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10μg/ml，这11个筛选浓度，每个浓度2个复孔）；
3)将孵育过夜的细胞清洗后，更换新鲜制备的梯度筛选培养基；之后置于37℃，5%CO2培养箱内孵育；
4)根据细胞的生长状态，约2-3天更换新鲜的筛选培养基；
5)每日监测细胞，观察存活细胞率，从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或者所有非感染细胞的抗生素最低浓度，也就是将用到的最优筛选浓度。
【注意】：如果发现细胞开始变圆但没有从平板表面脱落可能是以下情况，
a）变圆但是未脱落是细胞开始死亡的一个信号，这些需要更长的筛选时间；
b）若在建议浓度1-10μg/ml范围内还不能完全处死细胞，此时需要检测药物是否有效，避免药物的反复冻融（<5）。
注意事项
- 嘌呤霉素为有毒化合物，操作时需注意防护，切勿与身体或皮肤直接接触。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
常用筛选抗生素及其使用浓度
|
名称 |
抗性基因 |
有效筛选浓度（µg/mL） |
|
潮霉素B（Hygromycin B） |
大肠杆菌潮霉素抗性基因（hyg，hph） |
哺乳动物细胞：200-500 细菌/植物细胞：100-300 真菌：300-1000 |
|
杀稻瘟菌素S（Blasticidin S） |
蜡样芽孢杆菌的bsr基因 土曲霉的BSD基因 |
哺乳动物细胞：1-10 大肠杆菌：25-100 |
|
博莱霉素（Zeocin） |
Sh ble基因（Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene） |
哺乳动物细胞：50-1000 大肠杆菌：25-50 酵母菌：50-300 |
|
腐草霉素（Phleomycin） |
Sh ble基因（Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene） |
酵母菌：10 丝状真菌：25-150 |
|
遗传霉素（Geneticin，G418） |
Tn601 (903)或Tn5来源的新霉素抗性基因（neo） |
哺乳动物细胞：200-2000 植物细胞：10-100 酵母细胞：500-1000 网柄菌属：10-100 |
|
嘌呤霉素（Puromycin） |
链霉菌来源的嘌呤霉素N-乙酰转移酶基因（pac） |
哺乳动物细胞：1-10 大肠杆菌：100-125 |
相关产品
|
货号 |
名称 |
规格 |
|
MS0003-1G |
Hygromycin B潮霉素B（冻干粉） |
1g |
|
MS0003-20ML |
Hygromycin B (50 mg/ml)潮霉素B（50 mg/ml） |
20ml |
|
MS0007-1ML |
Blasticidin S (10 mg/ml)杀稻瘟菌素S（灭瘟素）（10 mg/ml） |
1ml |
|
MS0008-1ML |
Phleomycin (20mg/ml)腐草霉素（20 mg/ml） |
1ml |
|
MS0009-125MG |
Zeocin (100mg/ml) 博莱霉素（100 mg/ml） |
125mg |
|
MS0010-1G |
G418 Sulfate (Geneticin)遗传霉素 |
1g |
|
MS0010-20ML |
G418 Sulfate (Geneticin) (50mg/mL)遗传霉素（50mg/mL） |
20ml |
|
MS0011-25MG |
Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐 |
25mg |
|
MS0011-1ML |
Puromycin Dihydrochloride (10mg/ml)嘌呤霉素盐酸盐（10mg/ml） |
1ml |
|
MX2201-1ML |
Polybrene (10mg/ml)聚凝胺（10 mg/ml） |
1ml |