Asante Potassium Green-2 AM 钾离子指示探针


描述

Enhanced Potassium Green-2 AM 钾离子指示探针

产品标签

Enhanced Potassium Green-2 AM(EPG-2 AM) K+indicator;PBFI AM 钾离子指示剂/探,SBFI AM 钠离子指示剂/探针,Asante Potassium Green-2,Valinomycin缬氨霉素

产品信息

产品名称 产品编号 规格 规格
Enhanced Potassium Green-2 AM 钾离子指示探针 MX4513-100UG 2×50μg 1988
Enhanced Potassium Green-2 AM 钾离子指示探针 MX4513-250UG 5×50μg 4988
Enhanced Potassium Green-2 AM 钾离子指示探针 MX4513-500UG 10×50μg 7658

产品描述

Enhanced Potassium Green-2 AM(EPG-2 AM)是Asante Potassium Green-2 AM(APG-2 AM)的替代物,

是一种具细胞膜渗透性的新型K+荧光探针,具有容易加载、缓慢泄露、良好光稳定性和宽动力学范围等理想特征,正好弥补传统K+荧光探针PBFI AM(#MX4510)的缺陷。EPG-2 AM被可见光激发,最佳激发波长为517nm,但也能被传统波长488nm激发检测。虽然不是比率型探针,但其宽广的动力学范围使其甚至能检测到变化很小的K+浓度。EPG-2 AM用近红外波长的双光子激发下信号很强且抗荧光淬灭很好。也适用于共聚焦显微镜、流式细胞仪和高通量筛选分析。

保存与运输方法

保存:-20ºC避光干燥保存,1年有效。

运输:冰袋运输。

产品特性

1) 分子式:C55H64Cl2N2O19

2) 分子量:1128.02 g/mol

3) 纯度:> 80%(HPLC)

4) 最大激发波长:526 ± 3 nm(in methanol)

5) 最大发射波长:546 ± 3 nm(in methanol)

6) 解离常数(Kd):18mM

7) 动力学范围(Fmax/Fmin):12

8) 溶解性:溶于DMSO

9) 化学结构式:

常用操作流程(AM荧光探针)

以下步骤仅做参考,具体请根据实际情况或参考文献资料来调整。

1.1 使用无水DMSO溶解EPG-2 AM(Mw:1128.02 g/mol)配制成1-5mM储存液,比如往50μg EPG-2 AM冻干粉内加入22μl DMSO,充分溶解后配制成2mM储存液。-20ºC分装干燥冻存,避免反复冻融。

1.2 通常在含适当浓度AM探针的无血清培养基中实现探针加载。建议正式实验前向加载培养基内加入Pluronic F-127以促进AM探针的分散。可用DMSO配置20% Pluronic F-127储存液或其他浓度,只需在正式实验前将其与EPG-2 AM储存液混合,然后加入加载培养基,保证其终浓度<0.1%(w/v)。

1.3 室温或37℃孵育细胞(可能在室温的探针加载质量会高些),孵育浓度通常为1-10µM,孵育时间通常为30-60min,具体的请根据实际情况或参考文献资料。

1.4 【可选】对于大分子量AM探针(分子量≥1000g/mol),孵育结束,加入不含AM探针的细胞加载培养基额外孵育20-60min,以确保细胞将AM基团完全去酯化。

1.5 用不含血清和探针的培养基清洗细胞至少一次,以降低细胞外背景荧光。

1.6 最后用合适的仪器来检测荧光信号。检测用最大激发波长517nm,最大发射波长540nm。

【注意】:

a) 如果细胞加载培养基是以碳酸氢钠为缓冲体系,那么加载需要含5% CO2的环境内进行,以防止因CO2损失引起的培养基碱化。

b) 如果细胞加载培养基含血清,那需适当提高AM探针工作浓度,以补偿因AM探针与血清蛋白结合引起的损失。

c) 某些情况下,对分子量接近或超过1000的AM探针,需用不含AM探针的细胞加载缓冲液进一步孵育20-60min,以保证细胞内酯酶能充分降解AM基团。

d) 探针的加载时间和浓度因具体的细胞类型而有差异,请根据具体的细胞类型来优化。

e) 对每一种探针有必要通过校准(calibration)来得到实际解离常数(Kd)。物理条件如温度,pH,离子强度或溶液粘度,以及探针与细胞组成成分如蛋白质的相互作用,都会影响Kd值。实际情况细胞内的Kd比体外溶液通常要高。因此,细胞水平研究有必要进行校准确认实际Kd值。

f) 对于EPG-2,虽然最大激发波长在517m,但其极强的荧光亮度使其能够用标准的488nm滤片来激发,与Fluo系列的可见光钙离子指示探针检测手段一致。值得注意的是,488nm激发下得到的荧光强度约为最大激发波长下的40%。

注意事项

1) EPG-2 AM易受潮,粉末需干燥保存;粉末需用无水DMSO溶解,配制储存液(如10mM),置于-20℃干燥避光保存,小量分装避免反复冻融,至少3个月稳定。

2) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。