Coelenterazine e 腔肠素e；Coelenterazine 400 a 腔肠素400a； 海肾荧光素酶（Rluc）；萤火虫荧光素酶（Fluc）；Aequorin 水母发光蛋白；CAS NO：114496-02-5；

产品信息

产品名称	产品编号	规格
Coelenterazine e 腔肠素e	MX4611-500UG	500μg
Coelenterazine e 腔肠素e	MX4611-1MG	2×500μg

产品描述

腔肠素（Coelenterazine）是在水生生物中发现的一种发光基团（luminophore），是许多荧光素酶的作用底物，包括海肾荧光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜锚定荧光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和薮枝虫荧光素酶（Obelia luciferase），和发光蛋白包括水母发光蛋白（Aequorin）的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶，在含分子氧的条件下，氧化腔肠素产生高能量的中间产物，在此过程发射蓝色光，光波长在450~480nm【见图1】。而甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶（FLuc）系统不同，其在含分子氧的条件下，还需要ATP和Mg2+的存在才能同时发光，光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异，RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究，或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。腔肠素应用甚是广泛，包括：1）活细胞或组织的钙离子检测；2）细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子（活性氧，ROS）化学发光检测；3）基因报告基因检测；4）动物活体检测；5）ELISA和生物发光共振能量转移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）药物高通量筛选（HTS）；

天然腔肠素（Coelenterazine Native，CTZ-Native）是自然界中存在最丰富的一种腔肠素，也是目前应用最普遍的一种标准底物。不仅是脱辅基水母发光蛋白（APO）的底物，也是海肾荧光素酶（Rluc）和分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）等荧光素酶的作用底物。前者用于检测钙离子浓度，后者用作荧光素酶的报告基因检测系统。还可用于生物共振能量转移BRET，细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平（ROS）的化学发光检测等。

腔肠素e（Coelenterazine e，CTZ-e），是一种天然腔肠素衍生物，带有一个额外的乙基基团，从而形成一个额外的环形结构，最早由Shimomura进行描述。CTZ-e是一款优秀的海肾荧光素酶（Rluc）底物。CTZ-e产生的荧光接近于CTZ-Native的40%以上，虽然前者的初始荧光强度比后者高7倍多。CTZ-e/海肾荧光素酶的发射光谱有两个峰值，分别为418nm和475nm。

CTZ-e也是一款良好的脱酰基水母发光蛋白（APO）底物，与CTZ-Native相比，CTZ-e形成的水母蛋白复合物具有更快的荧光上升时间，并且呈现两个发射吸收峰（分别在405nm和465nm），吸收峰高度的比值取决于pCa 5-7范围内的钙离子浓度。这一双吸收峰特征使得CTZ-e/APO通过吸收峰强度的比例来测定钙离子成为可能。

产品描述

1）   CAS NO：114496-02-5

2）   化学名：12-Benzyl-8-hydroxy-2-(4-hydroxybenzyl)-5,6-dihydrobenzo[f]imidazo[1,2-a]quinoxalin-3(11H)- one; Benz[f]imidazo[1,2-a]quinoxalin-3(6H)-one,5,11-dihydro-8-hydroxy-2-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-12 -(phenylmethyl);

3）   同义名：e-Coelenterazine; e-CTZ; Coelenterazine-E; CTZ-E; CLZN-e; e-腔肠素；

4）   分子式：C28H23N3O3

5）   分子量：449.5 g/mol

6）   纯度：>95%

7）   外观：黄色至橙色固体

8）   溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO

9）   化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，且保存于惰性气体内。至少一年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   腔肠素（Coelenterazine， CTZ）及衍生物最好以完全冻干粉的状态保存在惰性气体内，密封后置于-20℃或-70℃长期避光保存。管内即使有微量空气，也会随着时间慢慢氧化腔肠素使其活性丧失，这样不同实验之间的定量结果可能很不可信。

2）   腔肠素（Coelenterazine， CTZ）及衍生物不建议以储存液的形式保存，最好于实验前配制新鲜的溶液。不建议将配好的腔肠素溶液储存在-20℃或-70℃，因其具有一个高能量的二氧杂环丁酮环形结构，即使在低温条件下都会自发降解。

3）   商业化腔肠素的种类繁多，有天然腔肠素，以及各种腔肠素衍生物（比如，腔肠素h，腔肠素400a，腔肠素e，腔肠素f，腔肠素hcp）。它们对钙离子的亲和力，光谱特性，以及应用倾向上会有差异，详见附录1—天然腔肠素及其衍生物的光谱特性，附录2—天然腔肠素及其衍生物的应用差异选择适当的产品。

4）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1.       实验前将CTZ-e从冰箱取出回至室温，之后低速离心使得管内固体（或粉末）落到管底。

2.       用酸化、脱气体的无水乙醇溶解固体（或粉末），混匀，使其浓度为1mg/ml。

3.       最好于实验前才对乙醇储存液进行稀释，再用于所有的鲁米诺分析或实验。根据具体的工作体系选择合适的水溶性缓冲液对乙醇储存液进行稀释。（比如，100μM 用于荧光计分析）

4.       将未用完的CTZ-e溶液保存在-80℃，尽快用完。不可将水溶性工作液进行保存（会被氧化从而降解）。

表1 腔肠素e与天然腔肠素的差异

	Renilla luciferase			Oplophorus luciferase			Aequorin
	Initial Intensity (%)	Total light (%)	Emission peak (nm)	Initial Intensity (%)	Total light (%)	Emission peak (nm)	Initial Intensity (%)	Total light (%)	Emission peak (nm)
CTZ	100	100	475	100	100	454	100	100	465
CTZ-e	750	137	418/475	82	54	459	0.8	50	405/465
Source: Inouye S, Shimomura O. Biochem Biophys Res Commun 233, 349-353 (1997)

附录1 天然腔肠素及其衍生物的光谱特性

附录2 天然腔肠素及其衍生物的应用差异

表2 –天然腔肠素及其衍生物的应用差异
产品名称	货号	应用特征
Coelenterazine native	MX4606	应用非常广泛的标准底物。腔肠素是天然水母发光蛋白复合物的发光基团，也是海肾荧光素酶（Rluc）的底物。底物的快速再生（fast regeneration）比较重要的实验推荐使用天然腔肠素。 1）生物发光检测钙离子的灵敏度非常高，检测范围从0.1µM到＞100µM；2）使用腔肠素监测报告基因表达是其主要应用；3）其他应用包括生物共振能量转移BRET，化学发光检测细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平（ROS）；
Coelenterazine h	MX4607	1）腔肠素h形成的水母发光蛋白复合物比天然腔肠素复合物的光强度高10倍以上；2）比天然腔肠素对钙离子敏感度更高；3）也适用报告基因分析。
Coelenterazine 400 a	MX4610	也称为DeepBlue C，是一种腔肠素衍生物，用作海肾荧光素酶Rluc的底物，发射峰约400nm。含GFP受体的BRET研究是Rluc的首选底物，因其对GFP受体的发射波干扰非常小。不可用作Gluc底物。
Coelenterazine hcp	MX4614	其生物发光强度最高（腔肠素hcp形成水母发光蛋白复合物的荧光强度比天然腔肠素复合物高190倍），对Ca2+反应速度快。
Coelenterazine cp	MX4613	Coelenterazine cp产生水母发光蛋白复合物的光强度是天然腔肠素复合物的15倍，且具有更快的Ca2+反应性。
Coelenterazine f	MX4612	腔肠素f形成的水母发光蛋白复合物的光强度是天然腔肠素复合物的20倍，最大发射波长约长8nm。具有最好的细胞渗透性。当需要具极高钙离子Ca2+灵敏度的水母发光蛋白复合物，建议用腔肠素f。
Coelenterazine n	MX4615	所有的腔肠素衍生物中荧光强度最弱，对Ca2+反应时间明显慢于天然腔肠素。一种非常有用的低灵敏腔肠素。
Coelenterazine e	MX4611	体外水母发光蛋白再生中腔肠素e的速度最高，具有双发射峰，分别为405nm和465nm，使其能在pCa 5-7范围内通过双发射峰荧光强度比率的方式测定Ca2+浓度，提高检测准确度。但由于渗透性差，不适合胞内应用。在溶液中稳定性差。
Coelenterazine i	MX4616	体外腔肠素i水母发光蛋白复合物的荧光强度仅为天然腔肠素复合物的3%，在所有腔肠素衍生物种对钙离子的反应时间最慢。
Coelenterazine ip	MX4618	体外腔肠素ip水母发光蛋白复合物的荧光强度几乎比天然腔肠素复合物高50倍，但对钙离子的反应时间比天然腔肠素慢。
Coelenterazine fcp	MX4617	腔肠素fcp形成的水母发光蛋白复合物的光强度是天然腔肠素复合物的135倍。
Methyl Coelenterazine	MX4619	非常优越的抗氧化剂，靶向细胞内来源于单态氧和超氧化物阴离子产生的活性氧物质（ROS）。

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