腔肠素（Coelenterazine）是在水生生物中发现的一种发光基团（luminophore），是许多荧光素酶的作用底物，包括海肾荧光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜锚定荧光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和薮枝虫荧光素酶（Obelia luciferase），和发光蛋白包括水母发光蛋白（Aequorin）的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶，在含分子氧的条件下，氧化腔肠素产生高能量的中间产物，在此过程发射蓝色光，光波长在450~480nm【见图1】。而甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶（FLuc）系统不同，其在含分子氧的条件下，还需要ATP和Mg2+的存在才能同时发光，光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异，RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究，或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。腔肠素应用甚是广泛，包括：1）活细胞或组织的钙离子检测；2）细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子（活性氧，ROS）化学发光检测；3）基因报告基因检测；4）动物活体检测；5）ELISA和生物发光共振能量转移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）药物高通量筛选（HTS）；

天然腔肠素（Coelenterazine Native）是自然界中存在最丰富的一种腔肠素，也是目前应用最普遍的一种标准底物。不仅是天然水母发光蛋白复合物的发光基团，也是海肾荧光素酶（Rluc）和分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）等的作用底物。还可用于生物共振能量转移BRET，细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平（ROS）的化学发光检测。

产品特性

1）   CAS NO：55779-48-1

2）   化学名：8-benzyl-6-(4-hydroxyphenyl)-2-[(4-hydroxyphenyl)methyl] -7H-imidazo [1,2-a]pyrazin-3-one

3）   同义名：Coelenterazine, nativ; native Coelenterazine; Coelenterazine free base; 腔肠素游离酸；

4）   分子式：C26H21N3O3

5）   分子量：423.46 g/mol

6）   纯度：>95%

7）   外观：黄色至棕黄色结晶性粉末

8）   溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，且保存于惰性气体内。至少一年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   腔肠素（Coelenterazine， CTZ）最好以完全冻干粉的状态保存在惰性气体内，密封后置于-20℃或-70℃长期避光保存。管内即使有微量空气，也会随着时间慢慢氧化腔肠素使其活性丧失。由此，不同组间的定量结果可能显得不可靠，数据可比性不高。

2）   腔肠素（Coelenterazine， CTZ）不建议以储存液的形式保存，最好于实验前配制新鲜的溶液。不建议将配好的腔肠素溶液储存在-20℃或-70℃，因其具有一个高能量的二氧杂环丁酮环形结构，即使在低温条件下都会自发降解。若是必须配成液体储存液，请按照操作步骤一、腔肠素工作液制备执行。

3）   体内动物实验，推荐使用我司（金畔生物）特别开发和优化的注射用天然腔肠素（Injectable native Coelenterazine）（#MX4607-1MG）或注射用腔肠素h（Injectable h-Coelenterazine）（#MX4609-1MG）。

4）   商业化腔肠素的种类繁多，有天然腔肠素，以及各种腔肠素衍生物（比如，腔肠素h，腔肠素400a，腔肠素e，腔肠素f，腔肠素hcp）。它们对钙离子的亲和力，光谱特性，以及应用倾向上会有差异，详见附录1—天然腔肠素及其衍生物的光谱特性，附录2—天然腔肠素及其衍生物的应用差异选择适当的产品。

5）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

一、 腔肠素工作液制备

【有关腔肠素溶解的注意事项】：

1）   腔肠素溶于甲醇或乙醇，不可溶于DMSO。腔肠素的水溶性相对比较低，一般情况需先将腔肠素溶于酸化的醇类溶剂配成相对高浓度的母液，然后再用水溶性缓冲液稀释到需要的工作液，现配现用。

2）   腔肠素在溶液中的稳定性比较低，最好于正式实验前才配制溶液（包括高浓度母液）。但若实际要求，必须保存母液，目前来说最稳定的溶剂是丙二醇，往内加入少量L-抗坏血酸，β-巯基乙醇，DTT，DTE，或少量HCl能维持其还原态。不过，还原剂可能会减低氧化腔肠素（氧化为Coelenteramide）的动力学速率。也有可能破坏荧光素酶活性。而冻存在醇类溶剂中可能引起腔肠素沉淀，实际取决于溶液浓度。当然，可通过加热50-60℃，使得沉淀重新溶解。必须确保无可见沉淀，或在实验前（特别是活体动物）离心去沉淀。

1.1   腔肠素母液制备

将低温保存的腔肠素粉末置于室温回温至少20min，低速离心后。往500µg天然腔肠素内加入98µl 酸化的甲醇溶液（100%甲醇中含有20µl/ml 3M或者6M HCl），配制成12mM（~5mg/ml）腔肠素母液。≤-20℃（最好-80℃）分装避光保存，可能会有少量活性的丧失，约保存4周。若存放在惰性气体内科延长保存周期。

1.2   腔肠素工作液制备

直接用去气蒸馏水（degased distilled water），PBS或者其他类型生理缓冲液稀释。现配现用。可直接用不含Ca2+/Ma2+的PBS将12 mM的储存液稀释到2mM（~1 mg/ml）的工作液，+4°C避光短暂存放。若是体外实验，需要使用前回至室温。