Mag-Fluo-4 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针

产品名称

产品编号 规格

Mag-Fluo-4 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针

MX4544-100UG

2×50μg

Mag-Fluo-4 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针 MX4544-500UG 10×50μg

具细胞膜渗透性的Mag-Fluo-4 AM是Fluo-4 AM(货号:MX4504-50UG)的一种结构类似物,对镁离子(Mg2+)和钙离子(Ca2+)的Kd值分别是4.7mM和22µM,是一种非常有用的细胞内镁离子指示剂和低亲和性钙离子指示剂。

产品特征

1)镁离子指示探针

Mag-Fluo-4与Thermo(invitrogen)公司的Magnesium Green indicator相比,具更加灵敏的Mg2+荧光反应。由于细胞内Mg2+的生理波动幅度通常很小,这一点点灵敏度的提高都是值得考虑的优势。与Fluo-4一样,Mag-Fluo-4在不含二价阳离子的情况下基本无荧光,一旦与Mg2+结合后,呈明显的荧光加强,但无光谱迁移(见下图)。

图. Mag-Fluo-4在0-50mM Mg2+溶液内的荧光发射光谱

2)钙离子指示探针

Mag-Fluo-4是Fluo-4的类似物,具有更低钙离子结合亲和性,特别适合用于检测1 µM~1 mM范围内的胞内钙离子水平。

产品特性

1) 同义名:Mag-Fluo-4acetoxymethyl ester,cell permeant

2) 分子式:C37H33F2NO18

3) 分子量:817.65g/mol

4) 外观:橙色固体

5) 纯度:≥90%

6) Ex/Em:494/516 nm

7) 溶解性:溶于DMSO

8) 化学结构式:

保存与运输方法

保存:-20ºC干燥避光保存,至少一年有效。

运输:冰袋运输。

 

注意事项

1)荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

1.储存液制备

取一管低温保存的Mag-Fluo-4 AM,置于室温回温至少20min。之后加入高质量无水DMSO配制成1~5mM储存液,比如50μgMag-Fluo-4 AM(Mw:817.65 g/mol)溶于12μl DMSO,充分溶解后,即得到5mM储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃,避免反复冻融,且要避光保存。尽快使用完。

 

2.操作步骤

【注意】以下使用方法仅作参考,需根据具体的细胞类型和实验要求做出调整。加载温度范围是RT~37℃,更高温度会提高加载速度,但更低温度能最小化染料的内在化现象。表面活性剂Pluronic®F-127有时加入能促进AM探针在水溶性缓冲液内的均匀分散。

2.1 在所需温度(25℃~37℃)预孵育细胞10min,使其离子梯度达到稳定和平衡。

2.2 取4μl Mag-Fluo-4 AM储存液和5μl 20% Pluronic®F-127,加入1ml细胞培养液,剧烈漩涡混匀得到均匀的探针分散液。

2.3 取250μl上述制备的探针分散液加入750μl含细胞的培养基内,混匀,此时得到终浓度为1~5μM的工作液,根据起始母液浓度来确定。

2.4 根据需求探针孵育15~60min。

2.5 细胞清洗3次,之后继续孵育30min以保证细胞内的探针完全去酯化。之后选择合适的仪器,进行荧光测定。

  

应用示例(来自文献,仅用作参考)

文献一、Zheng JM et al. MagT1 regulated the odontogenic differentiation of BMMSCs induced byTGC-CM via ERK signaling pathway. Stem Cell Res Ther. 2019 Jan 31;10(1):48.

使用方法(细胞内镁离子水平的流式检测):1)用生理培养液(120 mM NaCl, 20 mM HEPES, 4.7 mM KCl, 1.2 mM KH2PO4, 1.2 mM MgSO4, 1.25 mM CaCl2, and 10 mM glucose)于37℃预孵育BMMSCs细胞10min使其达到离子梯度的稳定和平衡;2)用DMSO配制Mag-Fluo-4-AM储存液1mM;3)取4ul Mag-Fluo-4-AM储存液(1mM)和5ul 20% F-127,加入1ml培养基内,充分混匀;4)取0.25ml 分散液加入0.75ml含细胞培养液,使得探针终浓度为1uM;继续孵育30min,之后清洗细胞3次,之后再孵育30min保证细胞内AM基团的完全去酯化;5)之后用流式细胞仪分析荧光强度(Ex/em:480/520nm)。

Fig 1. MagT1 knockdown reduced intracellular Mg2+ level in BMMSCs. Intracellular Mg2+ level was significantly reduced in MagT1 knockdown BMMSCs measured by indicator Mag-Fluo-4-AM using flow cytometry.

文献二、Ainbinder A et al. Role of Mitofusin-2 in Mitochondrial Localization and Calcium Uptake in Skeletal Muscle. Cell Calcium. 2015 Jan;57(1):14-24.

使用方法(肌浆钙离子的mag-fluo-4光度测定):趾短屈肌(FDB)肌肉纤维用Mag-Fluo-4-AM(4 µM)室温加载20min,之后用加含25 µM BTS的无探针溶液清洗20min。之后对纤维进行电刺激,用一系列抽搐刺激(1 ms pulse at 2 Hz)或5个连续性的强直电刺激。mag-fluo-4用480±15nm激发和535±30nm发射检测。

Fig 2. Measurement of mitochondrial Ca2+ uptake during twitch stimulation in mt-pericam expressing CTRL and Mfn2 KD FDB fibers. A. Average (±SE) traces of mt-pericam fluorescence (402 nm excitation/515 nm emission) in CTRL (black circles) and Mfn2 KD (white circles) fibers during twitch stimulation. B. Average (±SE) relative change in mt-pericam fluorescence (ΔF/F) in CTRL and Mfn2 KD FDB fibers during twitch stimulation. C. Representative mag-fluo-4 traces during twitch stimulation of CTRL (black trace) or Mfn2 KD (grey trace) FDB fibers. D. Average (±SE) relative change in myoplasmic mag-fluo-4 fluorescence during twitch stimulation of CTRL or Mfn2 KD FDB fibers.

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货号

名称 规格
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MX4544-100UG Mag-Fluo-4 AM, Cell Permeant镁离子荧光探针

2×50μg