K599；C58C1；MSU440；Agrobacterium rhizogenes发根农杆菌；pCAMBIA2301；Streptomycin链霉素；Rifampicin利福平；
| 货号 | 产品名称 | 规格 | |
| MF2456-0500UL | K599 Electrocompetent Cell农杆菌电转感受态细胞 | 10×50μl | |
| MF2456-2500UL | K599 Electrocompetent Cell农杆菌电转感受态细胞 | 50×50μl |
菌株描述
发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）是根瘤菌科农杆属的一种革兰氏阴性土壤细菌，能够侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。起关键作用的是其携带的Ri质粒，含有负责发根自主性生长和冠瘿碱合成的基因。结构上于Ti质粒类似，主要有致毒区（Vir），T-DNA区以及冠瘿碱合成功能区等。
根据合成冠瘿碱的不同，Ri质粒分为4种类型：1）甘露碱型；2）黄瓜碱型；3）农杆碱型；4）米奇矛型。
发根农杆菌菌株K599（NCPPB2659）含有pRi2659农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（葫芦科，豆科，茄科等），同时具有链霉素抗性。
我司金畔生物提供的K599电转感受态细胞经特殊工艺制作，特别适合大质粒的转化。基因型为Agrobacterium rhizogenes (strR ) pRi2659 (agropine type)，经pCAMBIA2301质粒（卡那霉素抗性）检测转化效率>105 cfu/μg DNA。
产品包装
| 组分编号 | 组分名称 | 货号（规格） | |
| MF2456-0500UL | MF2456-2500UL | ||
| MF2456-A | K599 Electrocompetent Cell | 10×50μl | 50×50μl |
| MF2456-B | pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl) | 10μl | 10μl |
保存与运输条件：
保存：-80℃保存，1年有效。
运输：干冰运输。
注意事项
1） 感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2） 整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3） 加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
4） 为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。
5） 电转感受态细胞中不可混入气泡，转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。
6） 平板上克隆密度过大时，由于营养不足，克隆生长变慢，菌落变小。为获得大菌落，应减少质粒用量。
7） K599具链霉素抗性，不可用于具链霉素抗性质粒的转化。
8） 为了保证最佳的转化效率，发根农杆菌的培养务必使用TY培养基（配方见附表1）。
9） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1) 将0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min，待其沥干水分，正置5min，使乙醇充分挥发干净，立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5min使其充分降温。
2) 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞插入冰中5min，待其完全融化。
3) 往50μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg（体积不大于6μl）质粒DNA，用手拨打管底使其混匀，立即插入冰中。用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-质粒之后快速转移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用【注意：质粒DNA最好用试剂盒抽提，且用双蒸水溶解。由于感受态转化效率较高，第一次使用最好做预试验确定最佳的质粒用量】。
4) 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数参考Bio-rad，具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。
5) 加入1ml无抗生素的TY并转移到感受态空管中，于28℃振荡培养2~3h。
6) 6,000rpm离心1min，留取100ul左右上清，之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的TY平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。
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附表1固体和液体TY培养基配方
| 组分Component | TY（液体）/升 | TY（固体）/升 |
| 胰蛋白胨Tryptone | 5g | 5g |
| 酵母提取物Yeast extract | 3g | 3g |
| 琼脂Agar | / | 15g |
| 补水到1L，121℃，20min高压灭菌 | 补水到1L，121℃，20min高压灭菌 | |
| 氯化钙CaCl2 | 配制1M CaCl2水溶液，121℃，20min高压灭菌。之后按照10ml/L加入上方灭菌的液体营养液。 | 配制1M CaCl2水溶液，121℃，20min高压灭菌。之后按照10ml/L加入上方灭菌的液体营养液。 |
附表2常见发根农杆菌对抗生素敏感性总表
| 农杆菌菌株 | 羧苄（carb） | 链霉素（strep） | 利福平（rif） | 庆大霉素（gent） | 卡那霉素（kan） |
| Ar A4 | S | S | S | S | R |
| Ar Qual | S | R | S | R | S |
| Ar 1193 | R | R | R | S | S |
| K599 | S | R | S | S | S |
| C58C1 | S | R | R | S | S |
| MSU440 | S | R | S | S | S |
| 【备注】：S代表敏感，R代表抗性。 | |||||
附表3常见农杆菌抗生素配制方法
| 抗生素 | 配方 | 母液 | 工作液 |
| 羧苄青霉素 | 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 | 50mg/ml | 50μg/ml |
| 硫酸卡那霉素 | 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 | 50mg/ml | 50μg/ml |
| 链霉素 | 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 | 10mg/ml | 50μg/ml |
| 庆大霉素 | 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 | 20mg/ml | 40μg/ml |
| 利福平 | DMSO溶解，0.22μm有机相滤膜除菌 | 10mg/ml | 20μg/ml |
| 氯霉素 | 无水乙醇溶解，0.22μm有机相滤膜除菌 | 34mg/ml | 34μg/ml |