Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

Rosetta-gami B(DE3);BL21(DE3);TunerTM;Origami;Rosetta;

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MF2340-1000UL

Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell 10×100μl

MF2340-5000UL Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell 50×100μl

菌株描述

Rosetta-gami B菌株融合了BL21(及其TunerTM衍生菌)、Origami和Rosetta这几大菌株的关键特征,不仅增强真核蛋白的表达,而且促进细菌细胞质内目的蛋白二硫键的形成。

→lacY1赋予其TunerTM菌的特征,半乳糖苷透过酶(lacY)突变使得IPTG均一化进入群体内的所有细胞,产生浓度依赖和匀质化的诱导水平。

→pRARE赋予其Rosetta菌的特征,补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AGG,AGA,AUA,CUA,CCC,GGA)对应的tRNA,位于一共存的氯霉素抗性质粒上,由天然启动子启动tRNA,提高了外源基因的表达水平。

→gor522::Tn10 trxB赋予其Origami菌的特征,含突变的硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin Reductase, trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, gor)基因,明显改善细胞质内二硫键的形成,增强蛋白的可溶性。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因)。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产,由IPTG诱导表达。 

Rosetta-gami B(DE3)菌株具有卡那霉素,氯霉素,和四环素抗性。兼容于具氨苄或壮观霉素抗性的载体。

Rosetta-gami B(DE3)菌株基因型:F– ompT hsdSB (rB– mB–) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pRARE (CamR, KanR, TetR)

产品包装

组分编号

组分名 货号(规格)
MF2340-1000UL MF2340-5000UL
MF2340-A Rosetta-gami B(DE3)Competent Cell 10×100μl

50×100μl

MF2340-B Control Vector puC19,10pg/μl 10μl

10μl

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1) 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2) 最好在冰上融化感受态细胞,插入冰内8min内加入目的DNA,不可在冰上放置过长,否则转化效率会降低。

3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4) 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

5) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低

6) 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

7) 为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间、温度、IPTG浓度(0.1~2mM)都需进行优化。

8) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀,冰浴静置25min。

2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

3) 向每个离心管中加700 μl无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含所选质粒筛选抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16h。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5,000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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