Rosetta-gami B(DE3)；BL21(DE3)；TunerTM；Origami；Rosetta；

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货号	产品名称	规格
MF2340-1000UL	Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell	10×100μl
MF2340-5000UL	Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell	50×100μl

菌株描述

Rosetta-gami B菌株融合了BL21（及其TunerTM衍生菌）、Origami和Rosetta这几大菌株的关键特征，不仅增强真核蛋白的表达，而且促进细菌细胞质内目的蛋白二硫键的形成。

→lacY1赋予其TunerTM菌的特征，半乳糖苷透过酶（lacY）突变使得IPTG均一化进入群体内的所有细胞，产生浓度依赖和匀质化的诱导水平。

→pRARE赋予其Rosetta菌的特征，补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子（AGG，AGA，AUA，CUA，CCC，GGA）对应的tRNA，位于一共存的氯霉素抗性质粒上，由天然启动子启动tRNA，提高了外源基因的表达水平。

→gor522::Tn10 trxB赋予其Origami菌的特征，含突变的硫氧还蛋白还原酶（Thioredoxin Reductase, trxB）和谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase, gor）基因，明显改善细胞质内二硫键的形成，增强蛋白的可溶性。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因）。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产，由IPTG诱导表达。 

Rosetta-gami B(DE3)菌株具有卡那霉素，氯霉素，和四环素抗性。兼容于具氨苄或壮观霉素抗性的载体。

Rosetta-gami B(DE3)菌株基因型：F– ompT hsdSB (rB– mB–) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pRARE (CamR, KanR, TetR)

产品包装

组分编号	组分名	货号（规格）
		MF2340-1000UL	MF2340-5000UL
MF2340-A	Rosetta-gami B(DE3)Competent Cell	10×100μl	50×100μl
MF2340-B	Control Vector puC19,10pg/μl	10μl	10μl

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2） 最好在冰上融化感受态细胞，插入冰内8min内加入目的DNA，不可在冰上放置过长，否则转化效率会降低。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

5） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低

6） 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

7） 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间、温度、IPTG浓度（0.1~2mM）都需进行优化。

8） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA，用手轻弹管底轻轻混匀，冰浴静置25min。

2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

3） 向每个离心管中加700 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16h。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5,000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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