BL21 (DE3)；Rosetta (DE3)；Rosetta (DE3)；表达感受态细胞；pET表达载体；IPTG诱导；
产品订购：
| 货号 | 产品名称 | 规格 | |
| MF2333-1000UL | Rosetta (DE3) Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 | 10×100μl | |
| MF2333-5000UL | Rosetta (DE3) Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 | 50×100μl |
产品组分：
| 组分编号 | 组分名称 |
货号（规格） |
|
| MF2333-1000UL | MF2333-5000UL | ||
| MF2333-A | Rosetta (DE3) Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
| MF2333-B | Control Plasmid puC19, 0.1ng/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
Rosetta宿主菌是BL21衍生菌，特别设计用于提高含大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达水平，这些菌株补充6种大肠杆菌缺乏的稀有密码子（AGG, AGA, AUA, CUA, CCC, GGA）对应的tRNA，位于兼容的氯霉素抗性质粒上，正因如此，Rosetta菌株提供“通用型”的翻译特征，而不限于大肠杆菌可利用的密码子。tRNA基因由天然启动子所启动。DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因）。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产，由IPTG诱导表达。
Rosetta (DE3)菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)pRARE(CamR)
产品描述
本品是大肠杆菌Rosetta (DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
保存与运输条件：
保存：-80℃保存，六个月有效。
运输：干冰运输。
注意事项
1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。
2） 最好在冰上融化感受态细胞。
3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
4） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
5） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(0.1ng/μl)，供对照实验用。
6） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
1） 取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管内，置于冰浴中。【注意：一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用。需注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。】
以下实验以50 μl感受态细胞为例。
2） 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴静置30min。
3） 42℃热击45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。
4） 向每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，150 rpm振荡培养45min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5） 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16h。
【注意】：
a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少，可通过离心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。
b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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