产品组分：

菌株描述

XL1-Blue菌株适用于蓝白斑筛选重组质粒，是一种优秀的宿主菌，用于质粒或λ载体的常规克隆应用。

XL1-Blue菌株具四环素抗性。XL1-Blue菌株能保证高拷贝质粒的稳定复制，recA和endA的缺失，确保插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的抽提。hsdR突变保护克隆DNA不被EcoK核酸内切酶系统切割。F′附加体上lacIqZΔM15基因的存在使其可进行蓝白斑筛选。

XL1-Blue菌株基因型：recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 supE44 (rk-,mk+), relA1 lac [F ́ proAB lacIqZ∆M15:Tn10 (TetR)]

产品描述

本品是大肠杆菌XL1-Blue菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率>109 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1. 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。
2. 最好在冰上融化感受态细胞。
3. 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
4. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
5. 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
6. 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。
7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀，冰浴静置25min。

1. 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
2. 向每个离心管中加入700 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
3. 低速离心收菌（比如4000rpm，2min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，之后倒置放于37℃过夜培养。【注意】：a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

   b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

   c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

   d）进行蓝白斑筛选实验，将含IPTG和X-Gal的LB固体平板置于37℃培养至少17h，从而让颜色生成。接下来再将平板置于4℃孵育2h能够加强颜色生成。

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附表2固体和液体2-YT培养基配方