菌株描述

JM110菌株适用于制备不含Dam或Dcm甲基化的质粒或噬菌粒DNA，使得DNA能被一种或更多甲基化敏感的限制性内切酶酶切。

JM110菌株缺乏绝大多数大肠杆菌菌株内发现的两种甲基化酶（Dam和Dcm）。Dam甲基化酶识别DNA序列GATC，在N-6位置将腺嘌呤残基甲基化；而Dcm甲基化酶识别DNA序列CCAGG和CCTGG，在C-5位置将内部胞嘧啶甲基化。JM110菌株在F′附加体上lacIqZΔM15基因的存在，使其能对重组质粒进行蓝白斑筛选。JM110菌株具有链霉素抗性。

JM110菌株基因型：rpsL (StrR) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44∆(lac-proAB) [F ́ traD36 proAB lacIqZ∆M15]

产品描述

本品是大肠杆菌JM110菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1. 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。
2. 最好在冰上融化感受态细胞。
3. 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
4. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
5. 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
6. 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。
7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1. 1. 从-80℃取出TOP10感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。
   2. 向融化的感受态细胞中加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹混匀（避免用移液枪上下吹打），冰浴静置25min。
   3. 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
   4. 向每个离心管中加入700 μl无菌培养基（2YT或LB，不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
   5. 复苏完成后，5000rpm离心1min收集菌体，留100μl左右上清轻轻吹打重悬菌体并涂布到无菌固体培养基（2YT或LB，含相应抗生素）上。
   6. 将平板正置于室温（或37℃）直至液体被吸收，之后，37℃培养箱内倒置培养过夜。如果进行蓝白斑筛选，至少培养13h。【注意】：a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少，可通过离心（5,000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

      b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

      c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。 

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