描述
DNase I Solution (RNase & Protease-free)
脱氧核糖核酸酶I溶液(无RNase&蛋白酶)
关键词:
Deoxyribonucleate 5 –Oligonucleotidohydrolase,5′-寡核苷酸-水解酶,Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas,EC No: 3.1.21.1,CAS NO:9003-98-9
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产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格(元) |
DNase I Solution (RNase & Protease-free)
脱氧核糖核酸酶I溶液(无RNase &蛋白酶) |
MF0405-200U | 200U | -20ºC | 198 |
MF0405-1000U | 1000U | -20ºC | 848 |
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产品描述
脱氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,缩写DNase I,在大多数细胞和组织中都能发现的一种核酸内切酶,偏好切割邻近嘧啶的磷酸二酯键,产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸,平均消化产物最小为多聚四核苷酸。Mg2+存在条件下,DNase I可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点;而在Mn2+存在条件下,DNase I识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I可水解多种形式DNA,如单链DNA、双链DNA,甚至染色质(其切割速率受组蛋白影响)。
脱氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,缩写DNase I,最早从胰腺中分离而来,至今哺乳动物胰腺也是最主要的来源之一。DNase I以两对二硫键结合的多种糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范围是pH 7-8,DNase的活性依赖于Ca2+,并可被二价金属离子如Co2+,Mn2+,Zn2+等激活。5mM Ca2+可保护酶使其不被水解,而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原来的1/2。
本品是即用型溶液形式的DNase I,不含RNase和蛋白酶,适用于各种RNA处理。另外还提供实验所需的反应缓冲液和终止液,节省时间且用起来更方便。
产品应用
◇ 制备不含DNA的RNA样本;
◇ RT-PCR反应前RNA样本内基因组DNA等可能存在DNA污染的去除;
◇ T7,T3,SP6等RNA聚合酶催化的体外RNA转录后DNA模板的去除;
◇ DNase I足迹法(DNase I footprinting)研究DNA-蛋白质相互作用;
◇ 缺口平移法标记探针用;
◇ 制备随机DNA片段文库;
◇ TUNEL细胞凋亡检测中用于剪切DNA制备阳性对照;
产品包装
组分编号 | 组分名称 |
货号(规格) |
|
MF0405-200U | MF0405-1000U | ||
MF0405-A | DNase I Solution (RNase & Protease-free) | 200U | 1000U |
MF0405-B | 10×Reaction Buffer | 200μl | 1ml |
MF0405-C | 10×Stop Solution | 200μl | 1ml |
保存与运输方法
保存:-20℃冻存,1年稳定。
运输:冰袋运输。
注意事项
1) 本DNase I的储存缓冲液为50mM Tris-acetate(pH 7.5),10mM CaCl2,50%(v/v) glycerol。如需对其进行稀释,则使用本储存缓冲液进行稀释。
2) 酶的使用过程中需放在冰盒或冰浴内,使用结束立即放回-20℃保存。
3) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
一、RT-PCR反应前RNA样本内DNA污染的去除
1.1 DNA模板经核酸内切酶线性化,用酚/氯仿和氯仿/异丙醇提取DNA,用乙醇沉淀后,溶于适量无菌去离子水中。
1.2 往一个RNase-free EP管内依次加入下列试剂:
RNA样本 | 1μg |
10×Reaction Buffer | 1μl |
用DEPC-treated Water补充 | 至9μl |
DNase I (1U/μl) | 1μl |
【注意】:如果需要处理较大量的RNA样品,可按比例放大上述反应体系。条件许可下最好往体系内加入适量RNase抑制剂(货号:MF0218-2KU)以防止RNA降解。
1.3 37℃孵育30min。
1.4 往上述体系内加入1μl 10× Stop Solution使其终浓度为1×,混匀。之后65℃孵育10min使DNase I失活。【注意】:一定要先加入10× Stop Solution,然后再加热失活RNase I,否则先加热可能引起RNA被降解。
1.5 加热处理后的RNA样品即可直接用作RT-PCR反应用的模板。
二、体外RNA反转录后模板DNA的去除
2.1 每个含有0.5μg模板DNA的反转录体系中加入1U DNase I,某些情况下模板DNA完全消化所需的DNase I需通过实验来摸索。
2.2 37℃孵育15min。
2.3 酚/氯仿抽提失活DNase I。
三、其他用途请参考上述方法或参考文献等进行。
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货号 | 名称 | 规格 |
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