CTGF ELISA 试剂盒

结缔组织生长因子CTGF（Connective Tissue Growth Factor）是一种由脐静脉和血管内皮细胞产生的约38 kDa的分泌蛋白。除了参与细胞粘附和软骨细胞的增殖和分化以外，它也被认为是组织纤维化的一个主要因素，还可作为纤维化疾病的候选标志物。

FUJIFILM Wako可提供用于检测CTGF全长的ELISA试剂盒以及检测全长+N末端的ELISA试剂盒，通过组合使用这两种ELISA试剂盒，能够准确检测作为特发性肺纤维化（IPF）候选生物标志物的血液N末端CTGF片段。

◆什么是CTGF？

CTGF（ Connective Tissue Growth Factor）是一种由脐静脉和血管内皮细胞产生的约38kDa的分泌蛋白。它是CCN (Cyr61/CTGF /Nov)家族的一种，亦称为CCN2。CTGF主要由Module 1 – Module 4的四个部分组成，Module 1称为IGF结合结构域，Module 2称为VWC结构域，Module 3称为TSP-1结构域，Module 4称为CT结构域。各结构域通过与不同的因子结合来发挥作用。

CTGF在组织纤维化中发挥重要作用，因此可作为纤维化的候选生物标志物。CTGF由TGF-β诱导表达，通过促进产生细胞外基质的肌成纤维细胞的分化和胶原蛋白的合成，从而参与纤维化^1）。在小鼠皮肤纤维化中，TGF-β和CTGF已被证明分别在纤维化的发生和持续中起重要作用^2）。此外，还有报告称CTGF与软骨细胞的增殖和分化，细胞间的粘连有关。

CTGF除了全长CTGF之外，还有Module 2 － Module 3间被切断产生的N末端(Module 1-2)CTGF和C末端(Module 3-4)CTGF。由于CTGF（C末端）容易被分解，所以血液中主要以CTGF （全长）和CTGF (N末端)的形式存在。CTGF (N末端)作为特发性肺纤维化(IPF: Idiopathic Pulmonary Fibrosis)的生物标志物备受期待³⁾，但由于CTGF（全长)和CTGF（N末端）同时存在，所以单独检测CTGF（N末端）非常困难。

◆试剂盒组成

96次用
抗体固相化孔板	1 plate
CTGF标准品	1支
缓冲液	20 mL
生物素结合抗体溶液	100 μL
过氧化物酶结合链霉亲和素溶液	100 μL
TMB溶液	12 mL
反应终止液	12 mL
清洗液（10×）	100 mL
标准品样品制备溶液	100 mL
孔板封条	4片

◆CTGF ELISA试剂盒 Wako

FUJIFILM Wako可分别提供检测CTGF全长以及全长+N末端的ELISA试剂盒。通过组合使用两种ELISA试剂盒，可准确检测特发性肺纤维化(IPF)的生物标志物——血液中的N末端CTGF⁴⁾。

产品系列

产品名称	CTGF（全长）ELISA试剂盒 Wako	CTGF（全长+N末端）ELISA试剂盒 Wako
产品编号	290-84701	292-84901
检测对象	CTGF（全长）	CTGF（全长+N末端）
检测原理
样品	人血清，人血浆(EDTA)
标准曲线范围	7.81-500 pM
所需样品量	人血清：5 μL，人血浆(EDTA)：10 μL
检测时间	2 h 50 min
检测法	显色法

◆性能数据

■ 全长，N末端片段，C末端片段的交叉性

分别使用各ELISA试剂盒与全长，N末端片段，C末端片段反应，确认其交叉性。

【结果】

CTGF（全长）ELISA试剂盒 Wako可以特异性检测CTGF全长，CTGF（全长+N末端）ELISA试剂盒 Wako可以特异性检测CTGF全长和N末端片段。

■ 与CCN家族的交叉性

确认了包含CTGF在内的与CCN家族的交叉率（500 pM，n=8）。

	CTGF ELISA（全长） 交叉率 (%)	CTGF ELISA（全长+N末端区域） 交叉率 (%)
CCN1	<0.5	N.D.
CCN2（CTGF）	100	100
CCN3	<0.5	N.D.
CCN4	<0.5	N.D.
CCN5	<0.5	N.D.
CCN6	<0.5	N.D.

N.D. = 未检出

【结果】

FUJIFIM Wako的试剂盒在CCN家族中，对CCN2(CTGF)显示高特异性。

■ 加标回收测试

CTGF(全长+N末端) ELISA试剂盒 Wako

样品ID	添加量 (pM)	检测值 (pM)	回收量 (pM)	回收率 (%)
人血清 样品No.15	0	61.5	―	―
	10	71.4	9.9	99
	50	110	48.5	97
	100	163	102	102
	150	215	154	103
	300	370	309	103
			平均	101
人血浆（EDTA） 样品No.15	0	71.5	―	―
	10	80.8	9.3	93
	50	121	49.5	99
	100	174	103	103
	150	227	156	104
	300	380	309	103
			平均	100

CTGF(全长) ELISA试剂盒 Wako

样品	添加量 (pM)	检测值 (pM)	回收量 (pM)	回收率 (%)
人血清 样品No.16	0	37.8	―	―
	10	47	9.2	92
	50	87.4	49.6	99.2
	100	141	103	103
	150	191	153	102
	300	343	305	102
			平均	99.6
人血浆 (EDTA) 样品No.16	0	16.9	―	―
	10	26.2	9.3	93
	50	65.6	48.7	97.4
	100	122	105	105
	150	173	156	104
	300	326	309	103
			平均	100

■ 稀释线性测试

CTGF(全长+N末端) ELISA试剂盒 Wako

人血清	人血浆

CTGF(全长) ELISA试剂盒 Wako

人血清	人血浆

◆应用数据

■ N末端CTGF的检测（稀释线性测试）

使用梯度稀释的人血清或人血浆(EDTA)，用CTGF（全长+N末端）ELISA试剂盒 Wako检测CTGF全长+N末端， 用CTGF（全长）ELISA试剂盒 Wako检测CTGF全长。求差值计算CTGF（N末端）量，确认稀释线性。

样品	稀释倍率	CTGF（全长＋N末端）（pM）	CTGF（全长）（pM）	CTGF（N末端）(pM）
人 血清	1/1	1735	952	783
	1/2	875	495	380
	1/4	417	237	180
人 血浆(EDTA)	1/1	684	126	558
	1/2	347	66.2	281
	1/4	157	34.9 * 参考值	122

【结果】

使用该方法检测定量CTGF（N末端），可观察到高稀释线性。

■ 健康者和IPF患者血浆中N末端CTGF的检测

使用CTGF（全长+N末端）ELISA试剂盒 Wako和CTGF（全长）ELISA试剂盒 Wako，检测从健康者以及特发

性肺纤维化（IPF）患者中提取的血浆（EDTA），并求出N末端CTGF的量。

健康者
ID	CTGF（全长+N末端）（pM）	CTGF（全长）（pM）	CTGF（N末端）（pM）
1	494	83.4	411
2	535	116	419
3	580	155	425
4	661	129	532
5	383	63.5	319
		mean	421
		SD	75.6

IPF患者
ID	CTGF（全长+N末端）（pM）	CTGF（全长）（pM）	CTGF（N末端）（pM）
1	1226	213	1013
2	1004	187	817
3	432	35.4	397
4	1422	278	1144
5	938	39.9	898
6	682	73.2	609
7	1123	168	955
8	849	45.5	804
9	857	60.6	796
		mean	826
		SD	221

【结果】

IPF患者血浆中N末端的CTGF量明显高于健康者。

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※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。

FAQ

◆关于样品

Q1：血液样品建议使用何种抗凝剂？

A1：参考以下文献，肝素血浆中CTGF（N末端）的值高于EDTA血浆和柠檬酸盐血浆。因此，不建议使用肝素作为抗凝剂。

A1：<参考文献> Miyazaki, O. et al.: Ann. Clin. Biochem., 47, 205(2010).

A1： Subtraction method for determination of N-terminal connective tissue growth factor

◆关于试剂盒

Q1：试剂盒中的抗体是否有销售？

A1：FUJIFILM Wako供应以下固相化抗体。

A1：抗CTGFModule 1，单克隆抗体（30D2）（产品编号：018-27423）

检测抗体不单独销售。FUJIFILM Wako可供应Module 2识别抗体（产品编号：015-27433）及Module 4识别抗体（产品编号：019-27453），但与本试剂盒使用抗体的克隆不同。

Q2：标准品是如何标价的？

A2：标准品参考以下文献进行标价。

A1：Miyazaki, O. et al.: Ann. Clin. Biochem., 47, 205(2010).

◆关于试剂盒的使用

Q1：本试剂盒进行检测时所需的试剂、器具和设备？

A1：使用本试剂盒需要以下试剂、器具和设备。

A1：●　纯净水（蒸馏水）

A1：●　标准溶液/样品稀释用试管

A1：●　清洗液稀释用玻璃器具（量筒/烧杯）

A1：●　可更换吸头的移液器（可准确移液10 μL以及 200~500 μL的一次性吸头）

A1：●　可连续分注100 μL的移液器

A1：●　具有吸水性的毛巾（清洗后去除孔板残留液体）

A1：●　涡旋振荡器

A1：●　微孔板振荡器（约500~800 rpm）

A1：●　96孔板用清洗器（建议使用）或清洗瓶

A1：●　读板器 (450±10 nm / 600~650 nm)

A1：●　数据处理软件

Q2：两个试剂盒必须配合使用吗？

A2：若检测CTGF (N末端, Module 1-2)，需两个试剂盒配合使用。

A1：若只检测CTGF（全长），只需购买CTGF(全长) ELISA试剂盒。

Q3：96次用可检测几个样品？

A3：标准品使用16孔（n=2），n=1时可检测80个样品，n=2时可检测40个样品。

 

Q4：试剂盒可分多次使用吗？

A4：可以，孔板设计为可每8个孔进行分割的样式，试剂盒包含充足数量的标准品。

A4：但是多次使用时，每次实验前都需重新绘制标准曲线，并且可检测的样品数量也会减少。另外，孔板封条只有4片，请根据需求进行使用。

参考文献

1.	Biernacka, A., Dobaczewski, M., and Frangogiannis, N. G.: Growth Factors, 29(5), 196(2011). TGF-β signaling in fibrosis
2.	Mori T., et al.: J. Cell Physiol., 181(1), 153(1999). Role and interaction of connective tissue growth factor with transforming growth factor-beta in persistent fibrosis: A mouse fibrosis model.
3.	Kono, M. et al.: Clin. Chim. Acta, 412, 2211(2011). Plasma CCN2 (connective tissue growth factor; CTGF) is a potential biomarker in idiopathic pulmonary fibrosis (IPF)
4.	Miyazaki, O. et al.: Ann. Clin. Biochem., 47, 205(2010). Subtraction method for determination of N-terminal connective tissue growth factor