BINKIT^® NK 细胞扩增套装（外周血单核细胞来源）

◆原理

BINKIT^® 可从外周血单核细胞扩增高活性的自然杀伤（NK）细胞。

◆优点・特色

●　无需饲养层细胞，即可从外周血细胞（PBMCs）中扩增 NK 细胞

●　３周时间内 NK 细胞的数目可扩增几百到几千倍

●　NK 细胞将获得增强的细胞杀伤性

●　该试剂盒适合 20~50 mL 的外周血细胞

●　无动物来源蛋白（含人白蛋白）

◆案例・应用

<试剂盒组成>

●　NK 细胞初始培养基

●　NK 细胞初始培养瓶

●　NK 细胞传代培养基

●　BINKIT^® 明细表（ PDF 格式）

<未提供材料>

●　Ficoll 淋巴细胞分层液（GE Healthcare）

●　无菌 PBS

●　FBS 或自体血浆（56℃ 加热 30 分钟以灭活）

<结果>

图 1 使用BINKIT^® 进行体外NK细胞扩增

利用 BINKIT^® 对外周血单核细胞进行 NK 细胞扩增，CD3-CD56+ 细胞从 15.8％ 增加到 88.6％ 。

图 2 使用BINKIT^® 进行体外NK细胞扩增

利用 BINKIT^® 对外周血单核细胞（来自健康自愿者，HD, ｎ=３）进行 NK 细胞扩增。

细胞计数（左）和倍率的变化（右）表明 NK 细胞体在外高效扩增。

图3  使用BINKIT^® 进行体外NK细胞扩增

分别以 BINKIT 扩增的 NK 细胞（实线）和从３名志愿者新鲜分离的 NK 细胞（虚线）来检测 NK 细胞对 K562 细胞的杀伤性。

结果表明，扩增后的 NK 细胞对 K562 细胞杀伤性显著增强（Ｐ< 0.01）。

<培养步骤>

(1) 准备试剂

在 NK 细胞初始培养基和 NK 细胞传代培养基中，加入５% (v/v) 的热灭活 FBS 或自体血浆。

(2) 制备外周血单核细胞（PBMCs）

通过 Ficoll 密度梯度离心，从人全血中分离外周血单核细胞。

(3)清洗NK细胞初始培养瓶

加入 10 mL PBS 至 NK 细胞初始培养瓶。倾斜培养瓶使 PBS 覆盖整个表面。

将培养瓶中液体全部倒出，小心以免刮伤培养瓶的表面。重复洗涤过程两次。

(4)从PBMCs中培养NK细胞

将 1×10⁶ cells/mL 的 PBMCs 悬浮于 NK 细胞初始培养基中。每 1 mL 细胞悬浮液加入 40 μL 的 NK 细胞初始混合物。

细胞悬液转移至预洗涤的 NK 细胞初始培养瓶，在 37℃，５％的 CO₂ 培养３天。

(5)更换培养基及传代

同贴壁细胞处理一样，转移时置于锥形离心管，200×g 离心８分钟。

去除上清，将 1×10⁶ cells/mL 细胞悬浮于添加了5% (v/v) 热灭活 FBS 或自体血浆的NK细胞传代培养基中。

转移后的悬浮细胞置于常规培养瓶中，在 37℃，5％ CO₂ 条件下培养。

每２-３天将 0.8×10⁶ cells/mL 细胞置于完全 NK 细胞传代培养基中，进行传代培养。

<建议培养期>

２-３周

注意：试剂仅供科研使用，不可用于临床。

参考文献

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